干細胞、原代細胞基質膠Biozellen?3D

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干細胞、原代細胞基質膠Biozellen?3D

產品詳細

Biozellen?3D 類器官培養(yǎng)基質膠套裝

Catalog No.： B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10
Specification ：2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage：根據組分保存溫度要求儲存. 1 年保存.
一、產品描述
Biozellen?3D 類器官培養(yǎng)基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到 3D 細胞培養(yǎng) 與微環(huán)境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試；植物膠體可快速形成水凝膠，請操作前詳細閱讀此使用指南。
（Biozellen?3D 類器官培養(yǎng)基質膠材料為植物來源，無動物成分）
二、應用
?3D 類器官培養(yǎng)。
?3D 細胞球體培養(yǎng)試驗
?細胞侵襲
?細胞遷移
?小鼠皮下成瘤
?適合用于 3D 細胞藥物篩檢平臺
?細胞生長和分化
?代謝/毒理學研究
?體外和體內血管生成分析
三、適用細胞種類
? 原代細胞 ? 干細胞

四、試劑盒組分

		B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10 （對應數(shù)量和內容）
貨號.	Components	Amount	Content	Storage
B-P-00003-A	A 基質膠 (2X)	4、8、20	0.5mL / tube	Store at-20℃
B-P-00003-C	C 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT	Store at 4℃
B-P-00003-D	D 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT	Store at 4℃

五、使用步驟：
A、試劑制備
A 基質膠：將 A 基質膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解.
C 緩沖溶液(1X)制備：使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如：無血清 DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
B、Biozellen?3D 類器官培養(yǎng)基質膠的制備全部步驟需要在無菌環(huán)境內操作，操作步驟如下：
1. 將 24 孔培養(yǎng)板放置于冰箱或者冰上預冷。
2. 細胞計數(shù)后取 2×105~2×107 細胞與 0.5ml 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合，并與 0.5ml 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度 1*105~1*107cells/mL。
注：請選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進行試驗。
3.取 20-40 微升步驟 2 含細胞的混合 A 膠溶液滴于步驟 1 預冷的培養(yǎng)板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4.待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液，并蓋過步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。
5.待 15 分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養(yǎng)基溶液。
6 將含有細胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內進行 7~14 天的培養(yǎng)，并觀察細胞球體的形成，按正常培養(yǎng)基更換頻率進行更換操作。
C、溶膠與收集細胞球體準備程序
小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用 1X PBS 進行清洗。
小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應 5 分鐘。溫和的用 1 毫升移液管吸取，直到膠滴完全溶解。
將含有細胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用 1000 rpm 的轉速離心 10 分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。
D、收集單顆細胞準備程序在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作 1. 添加 trypsin-EDTA 并與收集的細胞球體于 37°C 混合反應。
2. 用 1 毫升移液管混合，直到細胞體完全分解。
3. 待細胞球體完全分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉的轉速進行離心 10 分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。
E、細胞遷移實驗準備程序
1. 準備 Transwell 裝置及無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液 (用于稀釋 A 膠)。
2. A 膠 (2X) (貨號:B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解。
3. 用無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液將 A 膠 (2X)稀釋 50 倍。
4. 根據 Transwell 上室底部面積加入 100-120 ul/cm2 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。
5. 將步驟 4 在 4 ℃冰箱孵育 30 分鐘。
6. 將多余的稀釋液吸出，并在 Transwell 上室中加入無血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約 7.5 x 104 cells/well.。
7. 在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的細胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引癌細胞系進行遷移。
F、細胞侵襲實驗準備程序
1. 準備 Transwell 裝置及無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液 (用于稀釋 A 膠)。
2. A 膠 (2X) (貨號: B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解。
3. 用無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液將 A 膠 (2X)稀釋 1-2 倍。
4. 根據 Transwell 上室底部面積加入 70-80 ul/cm2 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。
5. 將步驟 4 在 4 ℃冰箱或者冰上孵育 10 分鐘（最好用冰包埋起來）。
6. 用冰的無血清細胞培養(yǎng)液稀釋 C 緩沖溶液(10X) (貨號: B-P-00003-C ) 至 1X C 緩沖溶液。(不可用 PBS 稀釋).
7. 步驟 5 孵育時間結束后再加入 70-80 ul/cm2 預冷稀釋后的 1X C 緩沖溶液。 (C 緩沖溶液用于 A 膠成膠反應)
8. 將步驟 7 在 4 ℃冰箱或者冰上孵育 15 分鐘（最好用冰包埋起來）。
6. 形成膠體后，將多余的稀釋液吸出。
7. 在成膠完成的 Transwell 上室中加入無血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約 7.5 x 104 cells/well.。 7. 在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的細胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引癌細胞系進行遷移及分泌基質蛋白酶 (MMP) 侵襲。
G、小鼠皮下成瘤實驗準備程序
1. 將 A 膠 (2X) (貨號:B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解。
2. 將 C 緩沖溶液(10X) 貨號:B-P-00003-C)與冰的無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清 DMEM 或內含 VEGF、heparin 的無血清 DMEM) 按 1:4 比例均勻混合配置。(例如:1 ml C 緩沖溶液(10X) 與 4 ml 無血清DMEM 混合，不可用 PBS 稀釋)

3. 將 A 膠 (2X) 與約 2*106 cells/ml 的癌細胞系懸浮液按 1:1 等比例均勻混合配置，癌細胞系懸浮液最終濃度約為 106 cells/ml。
4. 選用 21-25 G 的針頭 (避免破壞細胞)，抽取 0.2-0.3 ml 預冷稀釋后的 C 緩沖溶液。(C 緩沖溶液用于 A膠成膠反應)
5. 使用步驟 4 的同一支針管，再抽取 0.1-0.7 ml 含細胞的 A 膠混合液，在冰上孵育五分鐘。
6. 以皮下注射方式注射 0.3-1.0 ml 至小鼠。(需一次注射完含 C 緩沖溶液的 A 膠混合液) 注 1: 注射體積可依不同實驗目的做調整，若為血管生成研究注射體積需至少 0.5 ml。
注 2: 此步驟依實驗需求可執(zhí)行或不執(zhí)行，若需呈現(xiàn)明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷 5-10 分鐘。
7. 培養(yǎng)一至三周后可摘取接種的腫瘤組織。
注 3: 若為血管生成研究，應注射含 VEGF 及 heparin 的 A 膠，以促進血管生成。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。
六、案例分享
A.形成 3D 腫瘤球體成功案例分享

B.Biozellen 基質膠被溶解后分離的完整 3D 細胞結構照片

培養(yǎng)后的 3D 細胞球體，在 Biozellen 基質膠被試劑盒里面的
D Buffer 溶解分離后仍然可以得到完整的 3D 細胞結構