Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠套裝

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Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠套裝

產品詳細

Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠套裝
Catalog No.：B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
Specification：2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage：4℃保存、保存兩年
一、產品描述
Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠套裝包含整套基質膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到 3D 細胞培養(yǎng)與微環(huán)境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試；植物膠體可快速形成水凝膠，請操作前詳細閱讀此使用指南。
（Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠套裝為植物來源，無動物成分）
二、應用
?3D 細胞球體培養(yǎng)試驗
?小鼠皮下成瘤
?細胞遷移實驗
?適合用于 3D 細胞藥物篩檢平臺
?細胞生長和分化
?代謝/毒理學研究
三、樣本類型
?腫瘤細胞系、小鼠組織
四、試劑盒組分

		B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10 （對應數量和內容）
貨號.	Components	Amount	Content
B-P-00002-A	A 基質膠 (2X)	4、8、20	0.5mL / tube
B-P-00002-C	C 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT
B-P-00002-D	D 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT

五、3D 細胞球體培養(yǎng)試驗步驟：
A、試劑制備
1、A 基質膠：將 A 基質膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解.
2、C 緩沖溶液(1X)制備：使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如：無血清 DMEM、opt-MEM)
制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
3、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
B、Biozellen?3D 細胞培養(yǎng)基質膠的制備全部步驟需要在無菌環(huán)境內操作，操作步驟如下：
1、將 24 孔培養(yǎng)板放置于冰上預冷半小時。
2、細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養(yǎng)基均勻混合，并與 0.5 毫升 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度 1*105~1*107cells/mL。注：請選擇適當的培養(yǎng)溶液與條件進行試驗。
3、取 20-40 微升步驟 2 的混合液滴于步驟 1 預冷的培養(yǎng)板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。
4、待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液，并蓋過步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。
5、待 15 分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養(yǎng)基溶液。

6、將含有細胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內進行 7~14 天的培養(yǎng)，并觀察細胞球體的形成，按正常培養(yǎng) 基更換頻率進行更換操作。
C、溶膠與收集細胞球體準備程序
1、小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用 1X PBS 進行清洗。
2、小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應 5 分鐘。
3、溫和的用 1 毫升移液管吸取，直到膠滴完全溶解。
4、將含有細胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用 1000 rpm 的轉速離心 10 分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。
D、收集單顆細胞準備程序
在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作
1、添加 trypsin-EDTA 并與收集的細胞球體于 37°C 混合反應。
2、用 1 毫升移液管混合，直到細胞體完全分解。
3、待細胞球體完全分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉的轉速進行離心 10 分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。
六、細胞遷移實驗準備程序
1、準備 Transwell 裝置及無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液 (用于稀釋 A 膠)。
2、A 膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認完全融解。
3、用無血清 DMEM 細胞培養(yǎng)液將 A 膠 (2X)稀釋 50 倍。
4、根據 Transwell 上室底部面積加入 100-120 ul/cm2 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。
5、將步驟 4 在 4 ℃冰箱孵育 30 分鐘。
6、將多余的稀釋液吸出，并在 Transwell 上室中加入無血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約 7.5 x 104 cells/well.。
7、在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的細胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引癌細胞系進行遷移。
七、小鼠皮下成瘤實驗準備
程序 A、細胞房內材料準備、試劑制備及步驟
(1) 材料準備:
1. 冰盒、2. 37 ℃ 水浴槽、3. C 緩沖溶液(10X)、4. 無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清 DMEM，DMEM-F12等，不可用 PBS )、5. A 膠 (2X)、6. 細胞培養(yǎng)液、7. 23-26G 針頭、8. 1 mL 針筒、9. 細胞。
(2) 試劑制備:
1、C 緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃ 水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清 DMEM 或 DMEM-F12 等，不可用 PBS ) 稀釋 C 緩沖溶液 (10 X) 至 C 緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋 20 倍。使用前放置 37 度水浴槽。(例如:1 mL C 緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清 DMEM; 若未使用完畢，可先保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周)
2、A膠 (1X) 制備 : 將 A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃ 水浴槽回溫10分鐘，確認完全溶解。再將 37 ℃ 水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液取 0.5 mL，加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X)，配置成 1 mL 的 A膠 (1X)。使用前置于37度，可降低黏度。 (單次使用，勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )
(3)步驟:
1、取細胞溶液離心后收集細胞沉淀，與C緩沖溶液 (0.5 X) 均勻混合使細胞濃度為3*106 cells/mL。
2、A膠 (1X) 與步驟 1 含 C緩沖溶液 (0.5 X) 的細胞系懸浮液，按照 2:1 比例均勻混合配置，細胞懸浮液最終濃度為 106 cells/mL。使用前置于37℃，可降低黏度。 (C緩沖溶液用于A膠凝膠反應，例如0.5ml C 緩沖溶液(0.5 X)含細胞加入 1ml A膠 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)
3、選用 23-26 G 的針頭 (建議選用 24 G) 及 1 mL 針筒，抽取步驟2 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液至所需注射體積 (例如:0.2-0.6 mL) 。室溫37℃至20℃操作抽取。 (若抽取時發(fā)生塞針狀態(tài)，可先把針頭拔掉，以針筒進行抽取，建議一次抽取配置好所需針筒數量，避免步驟2 溶液過度凝膠，發(fā)生塞針)
4、將抽取好步驟 3 的針筒，帶入動物房, 若短時間無法施打建議置于冰上。
B、動物房內材料準備及步驟
(1)材料準備:
1. 含 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液的針筒、2. 皮膚消毒劑 (例如 : 酒精)、
3. 手套、4. 實驗小鼠、5. 麻醉小鼠的試劑
(2)步驟:
1、室溫下可直接注射。若是置于冰盒上的針筒，回到室溫后，待液化再進行注射。含 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液的針筒，以皮下注射方式，注射實驗所需的體積至實驗鼠 (建議皮下注射量為 0.2 mL，實際狀況依需求而定)。(針筒放冰上注射阻力會上升, 放室溫會液化注射阻力小。注射時若因凝膠緣故而阻力變大，需緩慢注射避免針頭噴落)
注1 : 注射體積可依不同實驗目的做調整，若為皮下血管生成研究注射體積需至少0.5 mL以上。
注2 : 此步驟依實驗需求可執(zhí)行或不執(zhí)行，若需呈現(xiàn)明顯的皮下注射隆起效果，可調整2.試劑制備將C緩沖溶液 (10 X) 稀釋15倍，變成C緩沖溶液 (0.66 X)，再執(zhí)行后續(xù)成膠實驗；提高C濃度，可提高膠體硬度。 2、培養(yǎng)一至三周后觀察量測接種的腫瘤尺寸。
注 3 : 若為血管生成研究，應注射含 VEGF 及 heparin 的 A 膠，以促進血管生成。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。
八、案例分享
A、形成 3D 腫瘤球體成功案例分享