干細(xì)胞、原代細(xì)胞基質(zhì)膠Biozellen?3D

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干細(xì)胞、原代細(xì)胞基質(zhì)膠Biozellen?3D

產(chǎn)品詳細(xì)

Biozellen?3D 類(lèi)器官培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝

Catalog No.： B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10
Specification ：2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage：根據(jù)組分保存溫度要求儲(chǔ)存. 1 年保存.
一、產(chǎn)品描述
Biozellen?3D 類(lèi)器官培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含整套基質(zhì)膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應(yīng)用到 3D 細(xì)胞培養(yǎng) 與微環(huán)境應(yīng)用等；本試劑盒操作便利且可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試；植物膠體可快速形成水凝膠，請(qǐng)操作前詳細(xì)閱讀此使用指南。
（Biozellen?3D 類(lèi)器官培養(yǎng)基質(zhì)膠材料為植物來(lái)源，無(wú)動(dòng)物成分）
二、應(yīng)用
?3D 類(lèi)器官培養(yǎng)。
?3D 細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn)
?細(xì)胞侵襲
?細(xì)胞遷移
?小鼠皮下成瘤
?適合用于 3D 細(xì)胞藥物篩檢平臺(tái)
?細(xì)胞生長(zhǎng)和分化
?代謝/毒理學(xué)研究
?體外和體內(nèi)血管生成分析
三、適用細(xì)胞種類(lèi)
? 原代細(xì)胞 ? 干細(xì)胞

四、試劑盒組分

		B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10 （對(duì)應(yīng)數(shù)量和內(nèi)容）
貨號(hào).	Components	Amount	Content	Storage
B-P-00003-A	A 基質(zhì)膠 (2X)	4、8、20	0.5mL / tube	Store at-20℃
B-P-00003-C	C 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT	Store at 4℃
B-P-00003-D	D 緩沖溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT	Store at 4℃

五、使用步驟：
A、試劑制備
A 基質(zhì)膠：將 A 基質(zhì)膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認(rèn)完全融解.
C 緩沖溶液(1X)制備：使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液(例如：無(wú)血清 DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
B、Biozellen?3D 類(lèi)器官培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備全部步驟需要在無(wú)菌環(huán)境內(nèi)操作，操作步驟如下：
1. 將 24 孔培養(yǎng)板放置于冰箱或者冰上預(yù)冷。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5ml 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合，并與 0.5ml 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細(xì)胞密度 1*105~1*107cells/mL。
注：請(qǐng)選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進(jìn)行試驗(yàn)。
3.取 20-40 微升步驟 2 含細(xì)胞的混合 A 膠溶液滴于步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上，膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。注: 測(cè)試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認(rèn)。

4.待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液，并蓋過(guò)步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。
5.待 15 分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長(zhǎng)之培養(yǎng)基溶液。
6 將含有細(xì)胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行 7~14 天的培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞球體的形成，按正常培養(yǎng)基更換頻率進(jìn)行更換操作。
C、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序
小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用 1X PBS 進(jìn)行清洗。
小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過(guò)膠滴于室溫反應(yīng) 5 分鐘。溫和的用 1 毫升移液管吸取，直到膠滴完全溶解。
將含有細(xì)胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用 1000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 10 分鐘，移除上清液體并收集細(xì)胞球體做分析。
D、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序在分離單細(xì)胞前，先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進(jìn)行操作 1. 添加 trypsin-EDTA 并與收集的細(xì)胞球體于 37°C 混合反應(yīng)。
2. 用 1 毫升移液管混合，直到細(xì)胞體完全分解。
3. 待細(xì)胞球體完全分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心 10 分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。
E、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序
1. 準(zhǔn)備 Transwell 裝置及無(wú)血清 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液 (用于稀釋 A 膠)。
2. A 膠 (2X) (貨號(hào):B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認(rèn)完全融解。
3. 用無(wú)血清 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液將 A 膠 (2X)稀釋 50 倍。
4. 根據(jù) Transwell 上室底部面積加入 100-120 ul/cm2 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。
5. 將步驟 4 在 4 ℃冰箱孵育 30 分鐘。
6. 將多余的稀釋液吸出，并在 Transwell 上室中加入無(wú)血清的癌細(xì)胞系細(xì)胞懸浮液使細(xì)胞濃度約 7.5 x 104 cells/well.。
7. 在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的細(xì)胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引癌細(xì)胞系進(jìn)行遷移。
F、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序
1. 準(zhǔn)備 Transwell 裝置及無(wú)血清 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液 (用于稀釋 A 膠)。
2. A 膠 (2X) (貨號(hào): B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認(rèn)完全融解。
3. 用無(wú)血清 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液將 A 膠 (2X)稀釋 1-2 倍。
4. 根據(jù) Transwell 上室底部面積加入 70-80 ul/cm2 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。
5. 將步驟 4 在 4 ℃冰箱或者冰上孵育 10 分鐘（最好用冰包埋起來(lái)）。
6. 用冰的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋 C 緩沖溶液(10X) (貨號(hào): B-P-00003-C ) 至 1X C 緩沖溶液。(不可用 PBS 稀釋).
7. 步驟 5 孵育時(shí)間結(jié)束后再加入 70-80 ul/cm2 預(yù)冷稀釋后的 1X C 緩沖溶液。 (C 緩沖溶液用于 A 膠成膠反應(yīng))
8. 將步驟 7 在 4 ℃冰箱或者冰上孵育 15 分鐘（最好用冰包埋起來(lái)）。
6. 形成膠體后，將多余的稀釋液吸出。
7. 在成膠完成的 Transwell 上室中加入無(wú)血清的癌細(xì)胞系細(xì)胞懸浮液使細(xì)胞濃度約 7.5 x 104 cells/well.。 7. 在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的細(xì)胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引癌細(xì)胞系進(jìn)行遷移及分泌基質(zhì)蛋白酶 (MMP) 侵襲。
G、小鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序
1. 將 A 膠 (2X) (貨號(hào):B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認(rèn)完全融解。
2. 將 C 緩沖溶液(10X) 貨號(hào):B-P-00003-C)與冰的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液 (例如: 無(wú)血清 DMEM 或內(nèi)含 VEGF、heparin 的無(wú)血清 DMEM) 按 1:4 比例均勻混合配置。(例如:1 ml C 緩沖溶液(10X) 與 4 ml 無(wú)血清DMEM 混合，不可用 PBS 稀釋)

3. 將 A 膠 (2X) 與約 2*106 cells/ml 的癌細(xì)胞系懸浮液按 1:1 等比例均勻混合配置，癌細(xì)胞系懸浮液最終濃度約為 106 cells/ml。
4. 選用 21-25 G 的針頭 (避免破壞細(xì)胞)，抽取 0.2-0.3 ml 預(yù)冷稀釋后的 C 緩沖溶液。(C 緩沖溶液用于 A膠成膠反應(yīng))
5. 使用步驟 4 的同一支針管，再抽取 0.1-0.7 ml 含細(xì)胞的 A 膠混合液，在冰上孵育五分鐘。
6. 以皮下注射方式注射 0.3-1.0 ml 至小鼠。(需一次注射完含 C 緩沖溶液的 A 膠混合液) 注 1: 注射體積可依不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖稣{(diào)整，若為血管生成研究注射體積需至少 0.5 ml。
注 2: 此步驟依實(shí)驗(yàn)需求可執(zhí)行或不執(zhí)行，若需呈現(xiàn)明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷 5-10 分鐘。
7. 培養(yǎng)一至三周后可摘取接種的腫瘤組織。
注 3: 若為血管生成研究，應(yīng)注射含 VEGF 及 heparin 的 A 膠，以促進(jìn)血管生成。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。
六、案例分享
A.形成 3D 腫瘤球體成功案例分享

B.Biozellen 基質(zhì)膠被溶解后分離的完整 3D 細(xì)胞結(jié)構(gòu)照片

培養(yǎng)后的 3D 細(xì)胞球體，在 Biozellen 基質(zhì)膠被試劑盒里面的
D Buffer 溶解分離后仍然可以得到完整的 3D 細(xì)胞結(jié)構(gòu)